Determinación del factor Rh por PCR

El objetivo de este experimento es la determinación del Rh utilizando para ello las técnicas de la PCR y de la electroforesis de ADN. Para ello, aislaremos el ADN de nuestra saliva y lo utilizaremos para llevar a cabo la reacción de PCR. La base de esta práctica es la amplificación de un fragmento del gen D. Los individuos Rh + producirán dos fragmentos de diferentes tamaños, mientras que los individuos Rh - producirán un único fragmento.
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18.Añadir 600 microlitros de etanol e invertimos el tubo varias veces, hasta disolver el pellet de ADN. Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 1 minuto. Eliminar el etanol con cuidado. Invertir el tubo sobre el papel absorbente limpio para eliminar el resto de líquido y dejar secar al aire unos minutos.

el sobrenadante en un tubo con 600 microlitros de isopropanol. Mezclar suavemente por inversión del tubo unos 40 - 50 veces.

16.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 2 minutos

a 13000 - 16000 rpm durante 5 minutos. Se formará un denso pellet en el fondo del tubo.

15.Verter el sobrenadante en un tubo con 600 microlitros de isopropanol. Mezclar suavemente por inversión del tubo unos 40 - 50 veces.

el sobrenadante en un tubo con 600 microlitros de isopropanol. Mezclar suavemente por inversión del tubo unos 40 - 50 veces.

14.Centrifugar a 13000 - 16000 rpm durante 5 minutos. Se formará un denso pellet en el fondo del tubo.

a 13000 - 16000 rpm durante 5 minutos. Se formará un denso pellet en el fondo del tubo.

27. Al terminar la electroforesis, llevar la placa de agarosa al transiluminador y enfocamos las bandas de ADN y leemos los resultados.

Al terminar la electroforesis, llevar la placa de agarosa al transiluminador y enfocamos las bandas de ADN y leemos los resultados.

26. Conectar fuente de alimentación durante 1h

Conectar fuente de alimentación durante

25. cargamos en el primer pocillo de la placa de agarosa (con la mezcla anteriormente preparada). Añadimos en la placa de agarosa C+, C- y la muestra.

cargamos en el primer pocillo de la placa de agarosa (con la mezcla anteriormente preparada). Añadimos en la placa de agarosa C+, C- y la muestra.

24.12 microlitros de marcador + 3 microlitros de tampón de carga.

microlitros de marcador + 3 microlitros de tampón de carga.

23. Llenar la cubeta con el tampon comprobando que el tampon cubre completamente la placa

Llenar la cubeta con el tampon comprobando que el tampon cubre completamente la placa

22. Preparación del tampón TBE-5X (En un vaso de precipitado de 1000 mL y con ayuda de un imán disolver los reactivos. Al disolver los reactivos, se echa todo en una probeta).Hacemos la preparación de gel de agarosa añadiendo por último 16 microlitros de SYBR - green.

22. Preparación del tampón TBE-5X (En un vaso de precipitado de 1000 mL y con ayuda de un imán disolver los reactivos. Al disolver los reactivos, se echa todo en una probeta).Hacemos la preparación de gel de agarosa añadiendo por último 16 microlitros de SYBR - green.

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